動物性食品中氮呱酮及代謝物殘留量測定的前處理方法

氮呱酮的危害及檢測目的

氮呱酮是一種丁酰苯類神經安定藥，動物使用後可消除緊張感，使其活動力下降，對環境淡漠並長期處於(yu) 安靜狀態。有助於(yu) 降低因應激及創傷(shang) 引起的死亡率，因此在長途運輸中常常給豬等動物使用該藥。氮呱醇是氮呱酮在動物體(ti) 內(nei) 的代謝產(chan) 物，與(yu) 原藥氮呱酮的化學結構相近，是氮呱酮的殘留標示物。通過食物鏈氮呱酮及其代謝產(chan) 物氮呱醇會(hui) 對人體(ti) 產(chan) 生直接的危害。為(wei) 此我國農(nong) 業(ye) 農(nong) 村部和國家市場監督管理總局2019年發布的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸(shou) 藥最大殘留*》中明確規定了氮呱酮及其殘留標示物氮呱醇在豬靶組織中的殘留*。

本文闡述了如何將氮呱酮及其代謝物從(cong) 樣品基質中分離提取出來，並經過淨化後，轉化成高效液相色譜可以檢測的形式。以提取、淨化為(wei) 重點，依據國標GB 29709-2013，為(wei) 檢測人員和相關(guan) 領域研究人員提供一定的參考。

檢測項目：氮呱酮、氮呱醇

應用範圍：豬的肌肉、皮+脂、肝髒和腎髒

高效液相色譜法

方法原理：試樣中殘留的氮呱酮和氮呱醇用乙腈萃取，正己烷除脂，MCX柱淨化，高效液相色譜測定，外標法定量。

前處理儀(yi) 器：

分析天平（感量0.01 g 和0.00001 g）；冷凍高速離心機；氮吹儀(yi) ；旋渦混合器；固相萃取裝置；超聲波清洗機；均質機；離心管；濾膜（0.2 μm）。

檢測儀(yi) 器：HPLC +PDA

樣品的製備與(yu) 保存

取新鮮或冷凍空白組織、供試組織，去除筋膜，絞碎，並使均質。

取均質後的供試樣品，作為(wei) 供試試料。

取均質後的空白樣品，作為(wei) 空白試料。

取均質後的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為(wei) 空白添加試料。

試料於(yu) 零下20 ℃ 以下保存。

前處理方法

1.提取

稱取試樣5 g±0.05 g，於(yu) 離心管中，加乙腈10 mL，旋渦混合1 min，超聲2 min，5000 r/min離心5 min，取上清液，殘渣中加乙腈10 mL重複提取一次，合並兩(liang) 次上清液。於(yu) 40 ℃水浴旋轉蒸幹。用2 %甲酸水溶液5 mL溶解殘餘(yu) 物，加正己烷4 mL，混勻，5000 r/min離心5 min，棄正己烷層液，備用。

2.淨化

MCX柱依次用甲醇3 mL、水3 mL和2 %甲酸水溶液3 mL活化，取備用液過柱，控製流速小於(yu) 1 mL/min，用2 %甲酸水3 mL和甲醇3 mL淋洗，抽幹，用5 %氨化甲醇4 mL洗脫。收集洗脫液，於(yu) 40 ℃氮氣吹幹，用流動相（乙腈-乙酸銨溶液1+1）1.0 mL溶解殘餘(yu) 物，旋渦混勻，供高效液相色譜法測定。

國標解讀及注意事項

1.氮呱酮和氮呱醇標準物質用甲醇配成1 mg/mL的標準儲(chu) 備液，在零下20 ℃ 以下避光保存，有效期3 個(ge) 月。

2.本方法使用乙腈兩次提取目標化合物，正己烷除脂，陽離子交換柱富集淨化，相當於5 g試料進行上機檢測。

3.MCX柱淨化方法為“酸上樣，堿洗脫”。

4.氨水甲醇溶液現用現配，避免氨水揮發，影響洗脫效果；洗脫過程中洗脫溶劑少量多次加入，可以增加洗脫率。

5.固相萃取過程中需要控製流速，使溶液一滴一滴地流下，以保證離子交換的效果。

參考文獻

GB 29709-2013 食品安全國家標準 動物性食品中氮呱酮及代謝物多殘留的測定 高效液相色譜法

圖1 豬組織中氮呱酮和氮呱醇殘留量測定的前處理流程圖

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