——————應用範圍：豬腎/肌肉組織——————

方法原理：氯丙嗪在堿性條件下用特丁基甲醚提取，並通過向提取液中加入磷酸鹽緩衝液（pH =3），使氯丙嗪被提取到緩衝溶液中，並用特丁基甲醚淨化緩衝溶液，改變緩衝溶液為堿性，將氯丙嗪反提取到特丁基甲醚中，濃縮，定容。供液相色譜-串聯質譜儀測定，外標法定量。

前處理儀(yi) 器：電子天平（感量0.1 mg和0.1 g）；離心機（大轉速為(wei) 10000 r/min）；離心管（錐形底玻璃離心管15 mL和10 mL具塞；錐形底聚丙烯離心管50 mL具螺旋蓋）；過濾器（聚四氟乙烯膜0.2 μm×13 mm；尼龍膜0.2 μm×47 mm）；液體(ti) 分配器（1 mL～10 mL和5 mL～50 mL）；微量移吸器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；流動相過濾裝置；氮氣濃縮儀(yi) ；高速渦流混合器；振蕩器；食物調理機；一次性移液管；酸度計（測量精度為(wei) ±0.02 unit）；超聲波儀(yi) ；一次性注射器（1 mL）；試樣瓶（2.0 mL）。

檢測儀(yi) 器：HPLC-MS/MS+ESI源

試樣製備

豬腎要去除脂肪和其他的非腎髒組織，豬肉要去皮和骨頭。將其絞碎拌勻。分出0.5 kg作為(wei) 試樣，將製備好的試樣密封，並做上標記。將試樣置於(yu) -18 ℃條件下貯存。

前處理方法

1.提取

稱取試樣2.00 g（精que到0.01 g）放入50 mL聚丙烯離心管中，加入200 μL乙腈進行渦流混合，混合後加入400 μL 5 mol/L氫氧化鈉溶液，並進行渦流混合30 s。在（80±5）℃水浴中放置1 h。在此期間，要對每個(ge) 測定樣品進行兩(liang) 次渦流混合。1 h後，將樣品從(cong) 水浴中取出並冷卻至室溫。加入12 mL特丁基甲醚，置於(yu) 振蕩器上高速振蕩15 min，離心15 min（轉速為(wei) 4000 r/min）。吸出上清液，定量將特丁基甲醚轉移到幹淨的15 mL玻璃離心管內(nei) ，待淨化。

2.淨化

將上述15 mL離心管中加入1 mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH=3）3 mL，振蕩10 min，離心10 min（4000 r/min）。將特丁基甲醚層吸出棄去。在磷酸鹽溶液中加入2 mL特丁基甲醚，振蕩5 min，離心5 min（4000 r/min），吸出特丁基甲醚層，棄去。然後再在磷酸鹽緩衝(chong) 溶液中加入2 mL特丁基甲醚重複上述步驟。加入1 mL 5 mol/L氫氧化鈉溶液搖勻後加入10 mL特丁基甲醚，振蕩15 min，離心5 min（4000 r/min）。定量吸取特丁基甲醚轉移到幹淨的10 mL離心管中。在40 ℃條件下用氮吹儀(yi) 蒸發至幹。在濃縮至幹的提取物中加入1000 μL流動相溶液，進行渦流混合，超聲處理10 min。用0.2 μm×13 mm的聚四氟乙烯注射式過濾器過濾樣液，將樣液轉移到試樣瓶中，供液相色譜-串聯質譜儀(yi) 測定。

國標解讀

1.氯丙嗪標準物質用無水乙醇配成0.10 mg/mL的標準儲備液，在2 ℃～4 ℃避光保存，有效期一年。

2.該國標通過改變提取溶液的pH值使氯丙嗪在特丁基甲醚和緩衝(chong) 鹽溶液之間轉移，達到淨化的目的。

3.移取特丁基甲醚的過程中，注意離心後輕拿輕放，保證液麵分層清晰，準確取出全部有機層溶劑。

4.在氮氣濃縮過程中注意控製溫度不要超過40 ℃，氣流在液麵上方0.5 cm處緩緩吹出，隨著液麵下降調整氣針高度，使有機溶劑吹至近幹狀態。

5.氮氣濃縮定容後，先渦旋再超聲，保證目標化合物充分溶解下來。

6.如果有條件，建議使用氯丙嗪同位素內(nei) 標進行回收率的校正。

參考文獻

GB/T 20763-2006 豬腎和肌肉組織中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟呱啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿紮呱隆、阿紮呱醇、哢唑心安殘留量的測定 液相色譜―串聯質譜法